Контакты: (812) 336-80-84
меднавигатор.рф

Лабораторная дифференциальная диагностика гриппа и ОРВИ

Амосова И.В., к.б.н., вед. научный сотрудник
Тимошичева Т.А., м.н.с.
Лаборатория биотехнологии диагностических препаратов
ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России, г. Санкт-Петербург


В России ежегодно регистрируется около 50 миллионов случаев инфекционных заболеваний. До 95% из них приходится на острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ), включая грипп [1]. Помимо вирусов гриппа в структуре заболеваемости ОРВИ достаточно высока роль возбудителей иной этиологии, среди которых более чем в 20% случаев выявляются респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), вирусы парагриппа и аденовирусы. Респираторные вирусы являются причиной 20% нозокомиальных пневмоний [2]. Экономический ущерб от ОРВИ можно сравнить лишь с затратами на профилактику и лечение длительно текущих сердечнососудистых и онкологических заболеваний. В связи с этим, ВОЗ разработала программу мониторинга и эпиднадзора за гриппом (Глобальная система надзора за гриппом), а также критерии для оценки эффективности диагностических тестов – это должны быть доступные, чувствительные, специфичные тесты, удобные для пользователя, быстродействующие и надежные, не требующие дорогостоящего оборудования [3, 4]. Эффективная профилактика и лечение инфекционных заболеваний также тесно связаны с ранним и точным выявлением патогена не только путем обнаружения инфекционных частиц в организме, но и путем определения профиля иммунного ответа и аспектов, которые придают устойчивость к терапии.

Применение современных гриппозных вакцин является одним из эффективных, безопасных и экономически оправданных способов профилактики гриппа среди населения. Своевременная вакцинация позволяет снизить заболеваемость гриппом в 1,4-1,7, уменьшает тяжесть болезни, предупреждает развитие тяжелых осложнений и летальных исходов [5].

Вакцинация против гриппа наиболее эффективна в случаях, когда циркулирующие вирусы соответствуют вирусам, содержащимся в вакцине. В связи с постоянным изменением вирусов гриппа сеть национальных центров по гриппу и сотрудничающих центров ВОЗ во всем мире ведут постоянный мониторинг вирусов гриппа, циркулирующими среди людей, и два раза в год обновляют состав противогриппозных вакцин. Эффективность гриппозных вакцин принято оценивать по приросту уровня специфических антител к гемагглютинину вирусов гриппа в парных сыворотках привитых лиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), которая основана на способности специфических антител ингибировать агглютинацию эритроцитов вирусами гриппа (рис. 1).


Рисунок 1. Результаты тестирования сывороток микрометодом РТГА.

Примечание: столбец К – контрольные лунки (0,5% куриные эритроциты), титр в РТГА для:
1 образца - 1:640,
2 образца – 1:160,
3 образца – 1:1280.

Уровень антител к гемагглютинину напрямую коррелирует с уровнем защищенности. При оценке потенциальной эффективности вакцины титр антител не менее чем 1:40 считают защитным [6]. Для контроля вакцин, выбора оптимальной композиции, дозы и кратности вакцинации используют гриппозные диагностикумы для РТГА. В основу производства «Диагностикумов гриппозных для реакции торможения гемагглютинации сухих» (ДИГ) и «Сыворотки диагностической гриппозной для реакции торможения гемагглютинации сухой» (СДГ) положены многолетние научные разработки лаборатории биотехнологии диагностических препаратов ФГБУ «НИИ гриппа» МЗ РФ, который является одним из учредителей ООО «Предприятие по производству диагностических препаратов» (ООО «ППДП»).

В эпидемиологической практике ДИГ применяются для субтиповой серодиагностики гриппа (по 4-х кратному приросту титров антител в сыворотках реконвалесцентов) при расшифровке природы эпидемических вспышек. Систематическое проведение таких исследований позволяет определить стадию эпидемического процесса и соответствующую тактику проведения противоэпидемических мероприятий. СДГ используются для идентификации типов и субтипов вирусов гриппа А и В, выделенных из материалов от больных, изучения антигенной структуры вирусного гемагглютинина, контроля специфичности штаммов вирусов гриппа, входящих в состав вакцин. 

Дифференциальная диагностика гриппа от ОРВИ необходима для осуществления эпидемиологического надзора за заболеваемостью и назначения своевременной противовирусной терапии, поскольку некоторые противовирусные препараты эффективны только на ранних стадиях инфекции. Понимание истинной причины заболевания также помогает избежать ненужного использования антибиотиков, которые часто назначают пациентам, инфицированным респираторными вирусами, и позволяет клиницистам прогнозировать возможные осложнения и иммунопатологические явления, которые могут возникнуть при этих инфекциях, а так же выявить группы риска.

ВОЗ рекомендует использовать для идентификации возбудителей острых респираторных вирусных инфекций метод флуоресцирующих антител (МФА) наряду с выделением вирусов в культуре клеток или полимеразной цепной реакцией [7]. МФА для определения вирусных антигенов отличается простотой, скоростью, низкой стоимостью и не уступает по чувствительности и специфичности современным вариантам иммуноферментного анализа [8] и наиболее эффективен в острой фазе (первые три дня) заболевания. Его результативность существенно зависит от правильности получения клинических материалов, скорости и условий доставки в лабораторию, а также качества используемых реагентов [9]. 

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сухие, выпускаемые ООО «ППДП», предназначены для быстрой (в течение 1,5-2-х часов) детекции вирусных антигенов в клинических материалах (мазки из носа, взятые от больных ОРВИ, содержащие клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки глубоких отделов носовой полости) или в клеточных культурах, инфицированных материалами от больных. Выпускаются препараты для ранней иммунофлуоресцентной диагностики вирусов гриппа А или В; аденовирусов или РСВ, вирусов парагриппа 1, 2 или 3 типа, вирусов герпеса 1 или 2 типов (рис. 2).


Рисунок 2. Метод МФА.

ООО «ППДП» постоянно повышает качество выпускаемой продукции за счет перехода от использования поликлональных сывороток к специфичным и чувствительным моноклональным антителам. Использование при конструировании диагностических тест-систем моноклональных антител обеспечивает высокую чувствительность и специфичность анализа, необходимый уровень стандартизации препаратов, а так же существенно облегчает интерпретацию результатов анализа.

Для выявления прироста антител в сыворотках реконвалесцентов, оценки коллективного иммунитета, оценки иммуногенности гриппозных вакцин, а так же в научных исследованиях широко используются иммуноферментные тест-системы для определения прироста уровня специфических антител класса IgG (ИФТС) к вирусам гриппа А (H1N1)pdm 09, А (H3N2), вирусам гриппа B обеих генетических линий (Викторианская и Ямагатская), аденовирусам, РСВ, вирусам парагриппа 1 и 3 типов в сыворотках людей, переболевших ОРВИ. Материалом для исследования служат парные сыворотки крови от больных ОРВИ, взятые в первые 5 дней болезни и через 14 – 30 суток от начала заболевания.

ИФТС представляет собой 13-компонентный набор, основными реагентами которого являются очищенные вирусные антигены, позитивные и негативные контрольные образцы сывороток, а также конъюгаты моноклональных антител к IgG человека.

Характерными особенностями ИФТС производства ООО «ППДП» являются:
  • высокая чувствительность анализа;
  • возможность использования микроколичеств сывороток (0,5 – 1 мкл);
  • снижение трудоемкости анализа за счет исключения операций титрования сывороток;
  • возможность индикации класс-специфических противовирусных антител; 
  • сокращение сроков проведения анализов.
ООО «ППДП» создано в целях обеспечения нужд практического здравоохранения современными эффективными препаратами для диагностики гриппа и других ОРВИ. Препараты готовятся по оригинальным технологиям с использованием актуальных штаммов вирусов гриппа в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Они безопасны в работе, т.к. не содержат инфекционного вируса. Лиофильно высушенные препараты длительно сохраняют свои диагностические свойства. ООО «ППДП» является отечественным производителем всего необходимого ассортимента иммунодиагностических препаратов, необходимых для надзора за гриппом и ОРВИ на территории России в рамках Глобальной системы надзора за гриппом ВОЗ.

Вся продукция производства ООО «ППДП» зарегистрирована в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения (Росздравнадзоре) и допущена к обращению на территории РФ:

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие гриппозные сухие

РУ № ФСР 2009/05255
от 09.07.2009 г.

Иммуноглобулин диагностический
флуоресцирующий аденовирусный
антигексоновый сухой

РУ № ФСР 2008/03940
от 26.12.2008 г.

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие
парагриппозные сухие

РУ № ФСР 2009/05254
от 09.07.2009 г.

Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие РС-вирусные сухие

РУ № ФСР 2009/05256
от 09.07.2009 г.

Диагностикумы гриппозные для реакции торможения гемагглютинации сухие

РУ № ФСР 2009/05253
от 09.07.2009 г.

Сыворотка диагностическая гриппозная для реакции торможения гемагглютинации сухая

РУ № ФСР 2009/05257
от 09.07.2009 г.


В 2016 г. ООО «ППДП» стала лауреатом Регионального конкурса «Лучший товар года», в 2018 г. - лауреатом Национального экономического рейтинга в номинации «Лучшая компания России - 2018».

Список литературы:

1. Карпова Л.С., Пелих М.Ю., Столяров К.А. и др. Пандемия гриппа в России как часть глобального распространения гриппа A(H1N1)pdm09 в 2009–2011 гг. Вопросы вирусологии. 2012, 57(6), 26-30.
2. Walter J.M., Wunderink R.G. Severe Respiratory Viral Infections: New Evidence and Changing Paradigms. Infect. Dis. Clin. North Am. 2017, 31(3): 455-74.
3. Blacksell S.D. Commercial dengue rapid diagnostic tests for point-of-care application: recent evaluations and future needs? J. Biomed. Biotechnol. 2012, 2012, 151967.
4. Wu G., Zaman M.H. Low-cost tools for diagnosing and monitoring HIV infection in low-resource settings. Bull. World Health Organ. 2012, 90(12), 914-20.
5. Грипп: эпидемиология, диагностика, лечение и профилактика / Под ред. акад. РАМН проф. О.И.Киселева, д-ра мед. Наук Л.М.Цыбаловой, акад. РАМН проф. В.И.Покровского. – М.: ООО «Издательство «Медицинское информационное агентство», 2012. – 496 с.
6. Войцеховская Е.М., Вакин В.С., Васильева А.А. и др. Иммуногенность новой гриппозной вакцины. Лечащий врач. 2009; 10: 77-79.
7. WHO Global influenza surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. Geneva: World Health Organization; 2011. 139 p.
8. Spencer K. Recombinant viral proteins for use in diagnostic ELISAs to detect virus infection. Vaccine. 2007, 25, 5653-9.
9. Gavin P.J. Review of rapid diagnostic tests for influenza. Clinical and applied immunology reviews. 2003, 4, 151-72.


© 2012 Меднавигатор.рф, Санкт-Петербург Обратная связь